SCCA-Lisa    XG004  
SCCA检测及量化的ELISA试剂盒
  
        鳞状细胞癌抗原（SCCA）是一种肿瘤细胞相关抗原，可作为很多种鳞状细胞癌的血清学及组织学标记。SCCA是卵清蛋白家族成员之一，具有Ser（丝氨酸）蛋白酶抑制剂作用。现已发现血液中SCCA蛋白的水平与一些临床晚期鳞状细胞癌（包括宫颈癌、肺癌、食道癌、脑颈部逆转乳头状瘤）具有很大的相关性，因而可以作为一种生物学标志物（Ref1,2）。另外，已报道，用免疫组化技术检测时，SCCA蛋白（SCCA1、SCCA2及SCCA-PD）在85％的肝细胞癌（HCC）患者的肝脏中超常表达（Ref3,4）。  
        对子宫颈鳞状细胞癌的临床研究显示了在肿瘤发生过程中游离SCCA水平上升的患者比例，从Stage  0的12％到Stage  IV的90％。肿瘤切除后游离SCCA水平下降，但是病情复发后90％的患者该抗原的水平重又升高。此外，检测疗后SCCA的水平还有助于监控病人的治疗效果、预测肿瘤的复发及病灶的转移（Ref  6）。
        SCCA-Lisa是一种灵敏、特异、标准化的Elisa试剂盒，可对组织/细胞的培养液、组织或细胞的蛋白提取物、及血浆或血清样品中的SCCA（SCCA1、SCCA2及SCCA-PD）蛋白进行体外检测及量化分析（Ref  7）。

基本原理：
        SCCA的检测通过与包被在微量滴定板上的捕获抗体的结合而实现（双抗体夹心法）。在  微滴定孔板上包被抗体，洗去未结合的蛋白，加入SCCA使之发生抗原抗体特异性结合后，加入生物素标记的第二抗体，再加入辣根过氧化酶（HRP）标记的链霉亲和素，最后加入过氧化物酶底物进行显色反应。由于捕获抗体及检测二抗的浓度跟SCCA的结合是一定的，反应孔中的光吸收值代表了SCCA抗原的浓度。

说明书：
提供的试剂及用品：
多条带检测板:  96孔板上用亲和纯化的兔抗SCCA抗体预包被
标准液：重组人SCCA封闭液：含100  ng/mL  BSA的PBS（1％的BSA）
第二抗体：亲和纯化的兔anti-SCCA的生物素标记的IgG（溶解于PBS中，浓度为200  μg/mL  ）。  
需自备的实验材料：
稀释液：PBS  buffer-1%BSA(W/V)0.05%Tween(v/v)  (PBS-S-T)
清洗缓冲液：
HRP-链霉亲和素：辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素
过氧化物酶底物：ABTS
微孔板清洗仪及ELISA检测仪

  

SCCA-Lisa  试剂盒的多条带检测板  
            
简要使用说明：
样品：分别在96孔板的每孔中加入100  μl稀释后的样品（浓度分别为10ng/mL,  5ng/mL,  2,5ng/mL,  1,25ng/mL,  0.31ng/mL,  0.16ng/mL），孵育1小时后用清洗缓冲液洗6次
第二抗体：用PBS-S-T稀释生物素标记的二抗至终浓度5μg/mL，每孔加100μL，室温下孵育1小时，用清洗缓冲液洗6次
HRP-链霉亲和素溶液：用稀释缓冲液以1:3000稀释后每孔加入100  μL，室温下孵育1h，洗6次
ABTS底物：每孔加入200  μL新鲜配制的ABTS底物溶液，置于暗处，室温下显色10-15分钟，酶标仪上405nm处测其吸光值OD。在标准曲线上找到相应的浓度值。标准曲线如图Fig.1所示。


参考文献：
1.  Uemura  Y  et  al,  Int  J  Cancer,  89:368-377(2000)  
2.  Cataltepe  S  et  al,  Clin  Chem  Acta,  295:107-127(2000)

3.  Ruvoletto  MG  et  al,  J  Hepatology,  36:  83(2002)

4.  Pontisso  P  et  al,  Brit  J  Cancer,  90(4):833-837  (2004)

5.  Duk  JM  et  al,  Gynecol  Oncol,  39:186-194(1990)

6.  Lara  PC  et  al,  Cancer,  76:758-764  (1995)

7.  Quarta  S  et  al,  Digestive  and  Liver  Disease,36:A19  (2004)

  
  
Fig.1  与底物孵育15分钟后SCCA标准曲线的线性范围