众所周知,PCR 实验室的各个实验区域之间应形成单向工艺流、物流与气流,实现单向流程的屏障保护。通过严格的单向流线,避免实验之间的相互干扰和交叉污染,防止核酸气溶胶对实验过程造成污染,产生假性结果。
PCR实验室建设三要素:
1、试剂准备区
用于试验试剂的准备。该区域为正压,目的是防止污染物质溢入。该区域内部又可分为3个区域:普通提取试剂的准备区、PCR试剂准备区和PCR主反应液准备区。在普通提取试剂的准备区内准备一些样品核酸提取时所需的裂解液、提取液等;PCR试剂准备区用于PCR试剂的制备和保存。例如准备引物、探针等PCR试剂。为了防止交叉污染,避免反复冷冻和解冻,试剂存贮溶液应该被平均为小的工作体积,储存在这个房间以备后用:PCR主反应液准备区将进行主反应混合液添加到PCR管的操作。
2、样品准备区
该区域无压力设置要求。该区域是用于对样品进行分样,将样品进行研磨、粉碎、匀浆的区域。由于在这些粉碎、研磨和匀浆处理过程中会产生气溶胶,因此,存在阳性样品污染后续操作的可能性。该区域与后面的区域应严格隔离,应放在与后面的三个区域隔开的独立的房间中。在样品准备区内还可设立一个专用的封闭区或房间用于样品的接收和储存。这个房间可以放置冰箱用于样品储存,应该和样品准备区其它区域隔离开。样品准备区域的人员不得进入试剂准备区。
3、核酸提取区
核酸提取区是进行样品核酸提取的区域。该区域为负压,目的是防止核酸溢出造成污染。样品准备区又包括从样品中进行核酸提取和纯化的区域以及将核酸加到包含PCR主反应混合液管中的操作区域。添加完样品后,PCR管的盖子要尽可能快地盖好。使用PCR板和胶盖时,阳性对照和含目标序列的样品要与待测样本分开操作,以避免模板添加时造成交叉污染
重要提示:这个房间里的一切物品不得带人试剂准备区。
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