液相色谱HPLC中的柱前衍生和柱后衍生

1、为什么要用衍生？

衍生化学反应就是加入衍生试剂，然后让样品和衍生试剂反应，生成液相可以检测出来的物质。然后在进行分析。当然，如果能直接进样测定出来的样品就不需要衍生了。

比如说，柱前衍生测定氨基酸。因为氨基酸既没有紫外吸收，也没有荧光发射。所以液相是测不出来的。

衍生化最为主要的目的就是提高目的物的可检测性。对于GC来讲，多数是为了增强目的物挥发性或者改善目的物极性；对于HPLC来讲多数是为了提高检测器对目的物的响应。

2、衍生化分类：柱前衍生和柱后衍生。

柱前衍生：在经过分析柱前使分析物与衍生剂反应，反应产物在分析柱上实现分离，实际分离的是衍生产物，检测的也是衍生产物；

柱后衍生：分离物在分析柱中实现分离后，在衍生池内与衍生剂反应，在柱子中分离的是目的物，在检测器处检测的是衍生产物。

3、适用的化合物：生物酸/碱、胺类、抗生素（聚醚类抗生素多见）和氨基酸类。

4、衍生化要求？

1）衍生剂必须过量且稳定；不过量，反应不完全，检测不充分；不稳定，重现性差。

2）衍生物、衍生产物和衍生副产物容易分离。如果只能检测到衍生产物。

3）衍生反应快速完全。反应慢，柱前衍生还可以，但柱后不行。因为流速固定，衍生池管路长度一定，留给衍生化的时间是一定的。柱前衍生可以在系统外等衍生完毕后进样，但也是影响效率的。

两种衍生比较

柱前衍生:

优点:对设备要求不高，可以手工衍生，而且对衍生时间要求相对宽泛。

缺点:引入了过多的物质，如：衍生剂、衍生产物（当然这个是检测需要的）和衍生副产物，对柱子有潜在的负面影响，另外采用手工衍生也会引入过多的影响因素。

柱后衍生：

优点:重现性好，影响因素少，引入物质比较少。

缺点:可能有扩散问题，在柱子中分离结束后，就存在扩散，如果衍生慢（必然流速低）、管路长扩散问题就会比较严重，再有就是要求有一套外源的泵系统和一个检测池，对于设备要求较高。

泰特仪器柱后衍生系统（光化学衍生，一级柱后衍生，二级柱后衍生）可以改善扩散问题，满足各种设备要求。 

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