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血球计数板基本构造

血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数区。计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。 计数区边长为1mm，则计数区的面积为lmm2，每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3。 　　使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。

血球计数板的使用
　　以计数酵母菌为例 　　(1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数. 　　(2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可. 　　(3)将血球计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加盖专用的厚玻片. 　　(4)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血球计数室内. 　　(5)计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要按对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数.如果规格为25格×16格的计数板,除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数. 　　(6)当遇到位于大格线上的酵母菌,一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞). 　　(7)对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数. 　　3.计算公式 　　(1)16格×25格的血球计数板计算公式: 　　酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100×400×10四次方×稀释倍数 　　(2)25格x16格的血球计数板计算公式: 　　酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80×400×10四次方×稀释倍数 　　4.血球计数板的清洁 　　血球汁数板使用后,用自来水冲洗,切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或用吹风机吹干,或用95%的乙醇,无水乙醇,丙酮等有机溶剂脱水使其干燥.通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物.若不干净,则必须重复清洗直到干净为止.

载玻片清理方法
　　清理方法：用清水洗或用酒精洗,然后再用棉花或纱布擦干净（用擦镜纸，手指避免接触载玻片，以免在其上留下指纹，影响下次观察使用）

盖玻片作用
盖玻片是盖在载玻片上的材料上的，可以避免液体和物镜相接触，以免污染物镜，并且可以使被观察的细胞最上方处于同一平面，即：距离物镜距离相同，使观察到的图像更清晰。

血球计数板测微尺的构造和使用方法
　　测微尺分目镜测微尺和物镜测微尺.目镜测微尺用来测量视野中的物体长度;物镜测微尺是标准长度,用来标定目镜测微尺. 　　(1)目镜测微尺的构造 目镜测微尺是一块圆形玻片,其中央刻有的刻度,通常是将5mm划分为50格,实际每格等于100μm.刻度的大小随着使用的目镜和物镜的放大倍数而改变,用前必须用物镜测微尺来标定. 　　(2)物镜测微尺的构造 物镜测微尺为一块特制的载玻片,其中央有一小圆圈.圆圈内刻有分度,将长1mm的直线等分为100小格,每小格等于10μm.

血球计数板目镜测微尺的标定
　　(1)取下目镜,旋下目镜上的透镜,将目镜测微尺放人目镜的中隔板上,使有刻度的一面朝下,再旋上透镜,并装入镜筒内. 　　(2)将物镜测微尺置于显微镜的载物台上,使有刻度的一面朝上,同观察标本一样,使具有刻度的小圆圈位于视野中央. 　　(3)先用低倍镜观察,对准焦距,待看清物镜测微尺的刻度后,转动目镜,使目镜测微尺的刻度与物镜测微尺的刻度相平行,并使两尺的左边条线相重合,再向右寻找两尺的另外一条重合线.(4)记录二条重合线间的目镜测微尺的格数和物镜测微尺的格数.